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原代细胞NK培养试剂盒简介

I.    NK细胞治疗简介 
        
以肿瘤免疫治疗为核心的生物治疗已成为继手术、放疗、化疗后的第4种治疗模式。此方法采用患者自身细胞诱导,激活自体细胞,辅助或者刺激人体自身免疫系统,完善或增强患者的免疫机能,因而治疗手段安全,基本无毒副作用,近年来显示出良好的临床应用前景。NK细胞又称大颗粒淋巴细胞,是先天性免疫系统的重要组成部分,是机体抗感染免疫、抗肿瘤免疫及清除异己细胞的第一道防线。NK细胞功能不同于T、B淋巴细胞,因为其识别靶细胞无主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)分子限制性,不需要抗原刺激预先致敏便可以直接杀伤肿瘤细胞及病毒感染细胞,所以NK细胞是人类病毒感染和恶性肿瘤的免疫过继治疗的潜在效应细胞。
       
NK细胞凭借其杀瘤谱广、杀瘤活性高的优势,可以在不损伤机体免疫系统结构和功能的前提下直接杀伤肿瘤细胞,并且具有调节和增强机体的免疫功能,尤其对手术后或放化疗后患者效果显著,能消除残留微小的转移病灶,防止癌细胞扩散和复发,提高机体免疫力,是目前新一代的肿瘤过继细胞免疫治疗首选方案之一。
       
目前国内NK细胞的分离培养技术良莠不齐,主要存在以下缺点:
        1、分离得到的细胞纯度低,活性小。目前国内采用的淋巴细胞分离方法分离得到的淋巴细胞纯度较低,其中混杂有粒细胞,血细胞,血小板且细胞活性低。通常采用的纯化NK细胞的方法有亲和板法、补体裂解法、绵羊红细胞花环法及Percoll不连续密度梯度离心法所获得的NK细胞细胞或者纯度低、或者数量少、又或者活性低,细胞碎片回输至人体后易引发病人产生发烧,炎症等不良反应。本试剂盒采用密度梯度离心法分离外周血,获得单核细胞,经因子诱导后得到的NK细胞纯度可以达到95%以上,细胞活性达98%以上。
       2、NK细胞增殖速度缓慢。目前国内培养的NK细胞增殖速度缓慢,无法达到肿瘤病人治疗所需要的数量级。本试剂盒在培养NK细胞14天后,细胞数量可达到1×109个/ml,充分达到肿瘤病人治疗所需的有效数量级

      3、有效抑瘤因子表达水平低。NK细胞的细胞毒性与CD3-CD56+的表达成正相关趋势。目前国内培养的CIK细胞中CD3-CD56+的表达低下,不足10%,本试剂盒培养的NK细胞中CD3-CD56+的表达高达28%,具有更好的临床效应。 


II.     PrimaCell™ NK试剂盒简介 

    PrimaCell™NK试剂盒是一个包含完整NK细胞的分离培养系统,以引导逐步诱导扩大培养NK细胞的试剂盒。NK细胞培养试剂盒为体外淋巴细胞培养试验,临床一些肿瘤患者等提供必备的培养试剂及耗材。

    NK细胞表达CD56 表面抗原,不表达CD3表面抗原,根据CD56抗原的不同表达,NK细胞可分为两大亚群,仅有约10%NK细胞为CD56brightCD16dim细胞,约90% NK细胞为CD56dim CD16bright细胞。CD56bright CD16dim细胞是主要的免疫调节细胞,能够产生大量的免疫调节因子,包括干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、TNF-β、粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage-colony stimulating factor,GM-CSF)、白细胞介素(interleukin,IL)-10以及IL-13,但自然细胞毒作用较弱。CD56dimCD16bright细胞主要发挥自然细胞毒作用,分泌细胞因子能力较弱。本试剂盒中所用NK 细胞分离和诱导体系中,CHI-1号试剂(9-1251)从外周血中分离PBMCs得率较高,纯度较好。CHI-2号试剂(9-1252)保证PBMNCs的活性较好。NK-1号试剂可以增强细胞的增殖作用及增强对IL-2R的刺激效应。NK-2号试剂可增加来自CD34+细胞的NK细胞数量,而且可以增加CD34+HSC上IL-2/IL-15R的表达。

    该试剂盒建立了分离诱导培养NK细胞的一个最佳实验体系,与文献中其他分离诱导体系相比,本试剂盒分离诱导得到的NK细胞增殖较快。该试剂盒适用于人和哺乳动物NK细胞分离培养,不含有HIV、HBV、HCV、细菌、支原体、真菌、酵母;不含有内毒素和苯。


III.     NK细胞试剂盒试剂耗材组成

          l 细胞分离体系-----CHI-1(人淋巴分离液)

          l 外周血样本处理体系----- CHI-2(2.5%的人BSA 的D-PBS)试剂

          l NK细胞增殖和诱导体系-----NK-1、NK-2号试剂 

          l NK细胞培养基

          l 1.8L细胞培养袋


附:NK细胞及细胞鉴定图片

培养第5天的NK细胞(×200

CD3-CD56+流式鉴定NK细胞



CD3-CD56+流式鉴定NK细胞

参考文献:

1.Yu H,Fehniger T A,Fuchshuber P et al.FLT3 ligand promotes the gene- ration of a distinct CD34+ human natural killer cell progenitor that respo- nds to interleukin-15[J].Blood,1998;92(10): 3647-3657

2. Miller J S,Tessmer-Tuck J.Endogenous IL-2 production by natural killer cells maintains cytotoxic and proliferative capacity following retroviral-mediated gene transfer[J].Exp Hematol,1997:25(11):1140-1148

3.Mingari M C,Vitale C,Cantoni C et al.Interleukin-15-induced maturati- on of human natural killer cells from early thymic precursors:selective expression of CD94/NKG2-A as the only HLA class Ispecific inhibitory receptor[J].Eur J Immunol,1997:27 (6):1374-1380

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6-3602  NK细胞试剂盒 kit ¥4500.00
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