血管是生物体运送血液的管道,为机体正常的新陈代谢和生长提供必要的氧气和营养物质,并输送走有害物质。血管内皮细胞(vascular endothelial cells ,VECs)是血管壁与血液中间的分界细胞。人体VEC表面面积的总和达6000m2,细胞总量达1011,重量达1000-2000g。VEC的形态呈单层、扁平、梭形或多边形。它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力,调节血压,抗血栓形成等有重要作用,具有相当活跃的内分泌和代谢功能,在血管通透性屏障、 免疫防御及炎性反应中起着极其重要的作用,在高血压,心、脑血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。
图1 血管细胞组成
图2 血管内皮细胞与疾病
大量研究表明血管内皮细胞是许多心血管疾病或危险因子作用的重要靶器官,具有相当活跃的内分泌和代谢功能,血管内皮细胞涉及多种疾病的发病机制,因而建立血管内皮细胞体外分离培养方法对于研究内皮细胞特性、对作用于血管的药物及抗肿瘤药物的研发具有重要意义。大鼠主动脉血管内皮分离简单,容易培养,可在体外连续传代培养。目前关于血管内皮细胞的实验研究主要集中于大鼠胸主动脉血管内皮细胞。而对于小鼠胸主动脉血管内皮细胞的研究相对较少。小鼠主动脉血管内皮细胞分离难度高,纯度低,易受杂细胞污染,如成纤维细胞。小鼠胸主动脉血管内皮细胞对生长环境营养要求高,易老化,冻存后复苏难。
图3 大鼠胸主动脉血管内皮细胞
小鼠胸主动脉血管内皮细胞来源于成年小鼠胸主动脉组织,是铺于血管内壁的一层多功能细胞,大多呈类圆形或多边形,形成单层后呈铺路石样排列。
图4 小鼠胸主动脉血管内皮细胞
大鼠主动脉内皮细胞细胞与小鼠主动脉内皮细胞形态上差别较大,大鼠主动脉内皮细胞胞体较大,形态偏梭形,传代后增殖速度较快,传代次数稳定。血管内皮细胞的标记物有CD31、vWF、CD34、第Ⅷ因子等。CD31作为细胞标志物之一,近年来较多的被应用于血管内皮细胞的鉴定。
图5 小鼠胸主动脉血管内皮细胞 vWF免疫荧光鉴定图(100×)
传统获取主动脉小鼠胸主动脉血管内皮细胞的分离方法有机械刮取法、血管内壁消化法、组织块贴壁法等。其中机械刮取法容易对细胞造成损伤,影响细胞活性。血管内壁消化法是将内膜外翻进行消化,操作难度大。组织块贴壁法操作简单,但培养周期长,并且易受杂细胞污染。齐氏生物在总结前人方法的基础上,应用改良的酶消化法,分离得到的小鼠胸主动脉血管细胞纯度高,成活率高,增殖速度快,可用于高血压,心、脑血管疾病发生发展研究以及心血管药物的研究及多种生理生化实验的要求。